【AASLD2022速递】整合HBV DNA相关研究进展

编者按：第73届美国肝病研究学会年会（AASLD2022）于当地时间2022年11月4日-8日在美国召开。

随着慢乙肝临床治愈研究的深入，目前对整合HBV的研究逐步增多，以探讨更多的生物学意义和临床应用。本次AASLD2022大会上，公布了多篇整合HBVDNA相关研究，肝霖君整理相关报告的数据与大家分享。

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33 在慢乙肝自然史中均可检测到整合HBVDNA，获得HBsAg清除后整合程度明显降低

研究背景

在慢乙肝自然史中，还没有很好地定义HBV整合程度的谱系。因此，中国香港大学李嘉诚医学院袁孟峰教授团队研究了处于不同免疫分期的慢乙肝患者和隐匿性HBV感染患者的HBVDNA整合情况。

研究方法

本研究共纳入53例处于不同免疫分期的中国初治慢乙肝患者（男28例，女25例），分别为HBeAg阳性感染期（EPI;n=3），HBeAg阳性肝炎期（EPH;n=11），HBeAg阴性感染期（ENI;n=7），HBeAg阴性肝炎期（ENH;n=12）以及HBsAg阴性期（SN;n=20）。SN组分为2个亚组：有HBsAg清除记录的SN患者（Sloss;n=10）和既往无HBsAg记录且可检测到HBVDNA的SN患者（NAT+;n=10）。所有患者进行配对测序和HBV整合的识别。

研究结果

每位患者的平均rawreads为1450万次。所有患者均可检测到HBV整合，共计97824个可检测的整合事件（Int）。各组中位Int分别为：EPI组905个，EPH组5957个，ENI组407个，ENH组520个，Sloss组26个，NAT+组15个。处于EPI/H分期患者的中位Int显著大于ENI/H分期（5939vs.419,p<0.0001）。感染期和肝炎期的中位Int无显著差异（EPIvs.EPH，ENIvs.ENH,p均>0.05）。HBsAg阴性（SN）患者的中位Int显著低于HBsAg阳性（SP）患者（23vs.937,p<0.0001）。Sloss组和NAT+组的中位Int相似（p=0.130）。

在HBsAg阳性患者中，Int与血清HBVDNA（r=0.43,p=0.012），HBsAg（r=0.68,p=0.005），ALT（r=0.35,p=0.043），肝内HBVDNA（r=62,p<0.001）和cccDNA（r=0.56,p=0.001）呈正相关；与年龄呈负相关（r=-0.46,p=0.007）；与HBcrAg无相关性。

在HBsAg阴性患者中，Int与ALT（r=0.44,p=0.053）和肝内HBVDNA（r=0.43,p=0.057）呈正相关；但与血清HBVDNA、HBsAg、cccDNA及年龄无关。

不同慢乙肝免疫分期患者的临床特征及检测到的HBV整合数

研究结论

所有慢乙肝患者均检测到整合HBVDNA。在慢乙肝自然史中，HBV整合程度各不相同，从HBeAg阳性期转换到HBeAg阴性期及HBsAg清除期时，其整合程度逐渐降低，也可能与患者发生肝癌的风险有关。

37 转录活化的整合HBV是临床治愈慢乙肝患者肝内残留HBsAg的主要来源，并可能导致HBsAg血清学逆转

研究背景

临床治愈患者肝内HBV标志物的特征尚不明确。因此，中山大学附属第三医院高志良教授团队研究了临床治愈时肝内HBV标记物谱系，并探讨了整合HBV在产生肝内残留HBsAg及导致HBsAg逆转方面的潜在作用。

研究方法

肝组织分别来源于临床治愈慢乙肝患者（n=52）、未临床治愈的HBeAg阴性慢乙肝患者（n=21）和未治疗的HBeAg阴性慢乙肝患者（n=14）。临床治愈患者接受聚乙二醇干扰素α（PEGIFNα）和/或核苷类似物（NA）治疗，获得了血清HBsAg清除，且HBVDNA检测不到。未临床治愈的慢乙肝患者接受基于PEGIFNα的治疗但未能实现HBsAg清除。

采用定量PCR检测肝内共价闭合环状DNA（cccDNA）和肝内HBVRNA水平，并在肝组织中进行HBsAg免疫组化以评估HBsAg阳性肝细胞占比，同时，通过HBV捕获测序和转录组测序分析HBV整合。

研究结果

临床治愈慢乙肝患者的肝内cccDNA水平和HBsAg阳性肝细胞占比显著低于未临床治愈和未治疗的慢乙肝患者。与未临床治愈的慢乙肝患者相比，临床治愈患者的HBV整合及嵌合转录水平均有下降。然而，在临床治愈慢乙肝患者中，有21.1%的患者的肝组织中残留HBsAg阳性肝细胞，有7.7%的患者虽然未检测到cccDNA但残留有HBsAg阳性肝细胞。表明临床治愈患者的肝内残留HBsAg主要来源于转录活化的整合HBV。

值得注意的是，1例未检测到cccDNA的临床治愈慢乙肝患者，经证实其肝内残留HBsAg阳性肝细胞来源于转录活化的整合HBVDNA。该患者复发后血清HBsAg水平较低，未检测到HBVDNA，且在HBsAg血清学逆转后继续随访48周，未再接受抗病毒治疗，患者的血清HBVRNA阴性。这提示转录活化的整合HBVDNA可能会导致HBsAg血清学逆转。

研究结论

转录活化的整合HBV有助于肝内残留HBsAg，并可能导致HBsAg血清学逆转。此外，cccDNA转录的最佳标志物可能不是血清HBsAg，新的cccDNA转录复制标志物有待进一步研究。

39在HBeAg阴性慢乙肝患者中，高水平的肝内整合HBVDNA与血清定量HBsAg水平相关

研究背景

循环中的HBsAg可能来源于肝内cccDNA和整合HBVDNA，因此，临床治愈可能取决于HBsAg的起源。本研究旨在评估未治疗的HBeAg阳性和阴性慢乙肝患者肝组织中的cccDNA和整合HBVDNA与血清病毒学参数的关系，并试图与肝内HBcAg和HBsAg免疫染色结果联系起来。

研究方法

本研究评估了北美乙肝研究网络（HBRN）中未经治疗的HBeAg阳性和阴性慢乙肝患者的肝脏组织学。采用基因测序分析cccDNA及整合HBVDNA，并检测血清HBVRNA、HBcrAg和qHBsAg水平。

研究结果

该研究队列（HBeAg阳性组24例，HBeAg阴性组32例）主要是亚洲人（75%），平均年龄44岁。HBeAg阳性组中肝内cccDNA、血清HBVDNA、HBVRNA、HBcrAg和qHBsAg均较高。cccDNA与血清HBVRNA（r=0.53,p<0.001）和HBcrAg（r=0.41,p=0.002）显著相关。HBeAg阳性组和阴性组中血清HBVDNA与HBVRNA的相关性均较强。在HBeAg阳性组中血清qHBsAg水平与血清HBVDNA或HBVRNA的相关性仅为中等，在HBeAg阴性组中相关性较弱。在HBeAg阴性患者中，整合HBVDNA水平与qHBsAg显著相关。

与HBeAg阳性组相比，HBeAg阴性组中肝内整合HBVDNA的比例更高。

在HBeAg阳性和阴性组中，分别有88%和13%的患者的肝内HBcAg染色呈阳性，分别有96%和88%的患者呈HBsAg染色阳性，分别有57%和64%的患者可见颗粒胞质HBsAg染色，分别有78%和14%的患者可见膜性HBsAg染色。

研究结论

血清HBVRNA和HBcrAg可以反映肝内cccDNA浓度。HBeAg阴性慢乙肝患者肝组织中整合HBVDNA水平较高，且与qHBsAg显著相关。整合HBVDNA产生的HBsAg可能是导致HBeAg阴性患者的血清HBVDNA和HBVRNA与qHBsAg和HBsAg免疫染色不一致的原因。这些发现对于设计以临床治愈为目标的治疗方案具有重要意义。

肝霖君有话说

目前针对整合HBVDNA的研究逐渐增多，这三项研究证实了整合HBV存在于整个慢乙肝自然史中，HBeAg阴性患者的整合HBVDNA的比例更高，当患者获得HBsAg清除后其整合程度明显降低。但是，整合HBV在转录水平的活化也参与了获得临床治愈患者的肝内残留HBsAg的形成，尤其是在HBeAg阴性慢乙肝患者中，高水平的肝内整合HBVDNA与血清定量HBsAg水平相关，这也可能导致HBsAg逆转。之前就有研究提出整合HBVDNA可以预测慢乙肝患者HBsAg清除（相关链接）。

近期高志良教授团队的研究也发现患者获得临床治愈后HBV整合程度明显降低（相关链接）。因此积极追求临床治愈，追求更低水平的HBsAg（超高敏），整合HBVDNA可能会更低，可能更加接近完全治愈。

参考文献：

[1]WongD,HoDW-H,LyuX,etal.ProfileofHBVDNAintegrationinthenaturalhistoryofchronichepatitisB.AASLD2022,Abstracts(33).

[2]GaoN,XieC,XuG,etal.TranscriptionallyactiveHBVintegrationcontributetoresidualintrahepaticHBsAginpatientswithfunctionalcure.AASLD2022,Abstracts(37).

[3]LauD,KimE,BaiC,etal.HighlevelsofintrahepaticintegratedHBVDNAthatcorrelatedwithserumquantitativeHBsAglevelinHBeAgnegativechronichepatitisB.AASLD2022,Abstracts(39).

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