HepDART 2019：将HBV RNaseH 作为慢乙肝药物靶标

现有的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染治疗可控制病毒血症并部分抑制疾病进展，但不能治愈。病毒共价闭合环状DNA（cccDNA）是HBV的转录模板。cccDNA 具有非同寻常的稳定性，这就意味着彻底抑制HBV DNA复制就需要彻底清除 cccDNA ，而这是目前治疗所无法实现的。

HBV核糖核酸酶H（RNaseH）对于病毒复制至关重要，因为在将其复制到DNA中后需要降解前基因组RNA。 通过抑制 RNaseH 正极DNA链的合成可阻止功能性HBV基因组的形成。为了改善病毒抑制效果并作为未来治疗方法的一部分，圣路易斯大学等研究机构研究人员探索 RNaseH 作为有吸引力但未开发的药物靶标。

重组HBV RNaseH在大肠杆菌中产生，并通过镍亲和层析纯化。酶分析使用淬灭荧光RNA oligo：DNA杂合体，其中通过裂解RNA链可消除淬灭。测试化合物是由药物化学合作者网络合成的。

病毒复制抑制是在细胞培养中使用链优先定量PCR测定法测量的，该测定可检测对病毒正-极性DNA链的抑制。细胞毒性通过MTS和其他测定法进行测量。通过对一系列微生物和脱靶酶进行反筛选可确保化合物的选择性。 协同研究使用Chou-Talalay方法进行。 体内功效研究采用了HBV感染的FRG嵌合小鼠。

研究人员鉴定了超过150种对细胞培养中的病毒复制有活性的HBV RNaseH抑制剂，这些抑制剂主要来自于α-羟基麦芽酮（αHT），N-羟基吡啶二酮（HPD）和N-羟基萘啶酮（HNO）。最好的化合物对病毒复制的EC50 <0.2μM，培养液中的治疗指数> 250。 SAR分析表明，这些抑制剂似乎通过协调RNaseH活性位点Mg ++离子起作用。

药代动力学分析表明该化合物为混合模型抑制剂，会干扰底物结合和催化。该抑制剂对HBV的选择性优于其他病毒，真菌和细菌病原体，并抗人类和大肠杆菌RNaseH。该抑制剂与拉米夫定具有协同作用，与衣壳抑制剂Hap12具有协同作用。 两种化合物均能显著抑制FRG小鼠体内的病毒复制，尽管观察到毒性，因为两种化合物均为未经过优化的初筛结果。

综上，研究认为HBV RNaseH 是未开发的药物靶标，值得利用。对HPD和HNO两种化学结构的医学效用的先导研究正在进行中，αHTs 的优化也已开始。

信息来源：The HBV ribonuclease H as a drug target