HepDART 2019：HBV抗病毒治疗可导致cccDNA转录调控

随着旨在实现HBV治愈新疗法的不断研究发展，量化控制或清除HBV感染肝细胞的负担至关重要。先前的研究数据表明，抗病毒治疗期间cccDNA的转录受到调控，约翰·霍普金斯大学研究人员在一项纵向研究中直接检验了这一假设。

研究招募了5名来自乙型肝炎研究网络的HIV-HBV合并感染者作为受试者，他们的肝活检配对时间相差约4年。使用单细胞激光捕获显微切割术（scLCM），研究人员从每次肝活检中分离出数百个单肝细胞，并分别提取RNA和DNA。 研究使用液滴数字PCR（ddPCR）来定量每个肝细胞中的cccDNA，基因组前RNA（pgRNA）和总HBV DNA。

在这五名受试者中，三名受试者在第一次活检时并未接受抗HBV治疗，但此后不久就开始抗病毒治疗。在第二次活检时，他们的血浆HBV DNA下降> 6 log IU / ml。在两次活检时，1/5名受试者间断地依赖于抗病毒药物抑制病毒复制治疗，两次活检之间 HBV DNA下降约1 log IU / ml（10 ^ 4至10 ^ 3 IU / ml）。第五位患者在两次活检时均接受抗HBV治疗，两次活检中均未检测到HBV DNA。

在第一次活检时感染还不受控制的三名个体中，> 90％的肝细胞被感染，并在治疗后下降至?30％，这一比例与先前对> 7年治疗个体的数据一致。在个体HBV病毒形式中，三位个体在活检之间pgRNA的下降值最大，平均水平范围从第一次活检的53-1254 cp /cell到第二次活检的0.2-36.9 cp /cell。

在第一次活检时，这三个个体的感染细胞中cccDNA的平均水平在3.4-3.5 cp /细胞之间，第二次活检时在2.8-3.4 cp /cell之间。转录沉默的肝细胞定义为cccDNA +和pgRNA阴性，这三名受试者从活检1增加到活检2。

在两次活检之间仍然无法检测到的人中，在两次活检之间转录沉默细胞的数量从1.6％增加到7.8％，最大pgRNA从78.4减少到18.7，而pgRNA阳性的细胞比例相对稳定（分别为15.5％和 14.4％）。

在一个下降1 log IU / ml的个体中，两个时间点均有超过90％的肝细胞感染，所有病毒形式的水平均保持恒定，并且在两次活检中均没有转录沉默细胞。

总之，大多数肝细胞是在不受控制的HBV感染期间感染的，经过多年的核苷（酸）类似物治疗后，可将其降至约30％的水平。通过治疗，HBV viroscape是动态的，并且HBV核酸的数量减少。

但是，该项研究证实，即使无法检测到HBV DNA，也有相当一部分被HBV感染的肝细胞是转录沉默的，并且通常随着治疗时间的延长而增加。

这些发现表明，HBV的抗病毒治疗导致cccDNA的转录调控。 因此，需要进一步的工作来理解转录沉默的机制。此外，作用机理依赖于HBV转录的新兴疗法可能需要支持这些细胞中重新激活转录的策略。（更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）！

信息来源HepDART 2019大会论文集：Single hepatocyte molecular analysis of HBV from paired biopsies in HIV-HBV coinfection