EASL2021：Gapmers 和/或 siRNA 联合或可作为基因疗法用于HBV感染

由于技术发展所限，现有技术手段还没办法彻底根除细胞内的乙肝病毒（HBV）cccDNA，cccDNA在细胞内的持续存在给乙肝病毒蛋白的持续表达提供了源泉，并且致使部分慢性乙型肝炎病毒感染发展为肝癌，提示目前的治疗策略仍有较大的局限性，需要开发新的治疗策略以解决问题。

基因沉默技术在处理乙肝病毒感染上有可能是一项有价值的策略，乙肝病毒（HBV）X基因（HBX）由于其末端共定位（co-terminallocalization），可能是一个基因沉默技术最佳的靶标。

在2021年的欧洲肝病学会年会上，来自巴塞罗那瓦勒德希伯伦大学医院（VallD’hebronUniversityHospital）等研究机构的研究人员介绍了一种基于反义锁核酸(LNA)Gapmer(GP)和靶向HBX超保守区域的siRNA基因治疗策略。

首先，研究人员将HepG2-NTCP细胞用2.5％DMSO处理至少14天，然后通过在37oC环境下以500个基因组当量的HBV进行感染旋转接种（spinoculation）1h，并孵育过夜。在感染后第48h或第5天，使用TransIT-X2（Mirus）用Gapmer（GP）（50nM的GP1和/或GP4，Qiagen）和/或siRNA（50nM）处理感染的细胞。每个实验中都使用了一个加干扰的对照Gapmer。

处理72小时后收集细胞和上清液。通过RNAeasyPlus微型试剂盒（Qiagen）从细胞中提取前基因组RNA（pgRNA），并使用TaqMan探针（Roche，Lightcycler?480）通过RT-qPCR进行定量。通过化学发光酶法（Roche，COBAS?8000）对上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量。

研究结果显示，感染后早期（在感染后48h时），GP1处理使pgRNA、HBeAg和HBsAg的抑制率均超过70%（分别为75.5±9.9%；74.7±6.4%和72.4±7.7%）。

不同的是，GP4的抑制作用比GP1低7.4到13个百分点（pgRNA、HBeAg和HBsAg分别为62±17%；66.1±11.2%和64.7±12%）。

当GP在感染后稍晚期（感染后第5天）引入时，GP1和GP4对pgRNA的抑制作用均降低（分别为53.5±29%和58.5±17%）。

如果考虑病毒蛋白表达，则效率较低（两种GP均低于48%）。

值得注意的是，两种GP或GP与siRNA的组合提高了pgRNA的抑制效率（GP1+GP4；GP1+siRNA；GP4+siRNA分别为69.1±16.5%；66.7±12.2%；63.8±21%），只是部分改善病毒蛋白抑制。

综上数据，研究认为在体外环境中Gapmers似乎是抑制HBV表达的有价值的分子。通过将GP相互组合或与针对同一超保守区域的siRNA组合，可以提高它们在建立生产性感染(5dpi)后的有限效率。

然而，研究人员认为还需要进一步的实验来证实这些结果，并测试其他递送系统以提高治疗效率。（更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）！